實驗目的
1、 熟悉酶免疫技術基本原理和方法、免疫熒光技術的基本原理。
2、 了解酶聯免疫吸附實驗（間接法）的基本過程及其作用。
目前應用zui多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進行的抗原抗體反應均在載體表面進行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔）上，然后加被測溶液，倘樣品中有相應抗原，則與抗體在載體表面形成復合物。洗滌后加入酶標記的特異性抗體，后者通過抗原也結合到載體的表面。洗去過剩的標記抗體，加入酶的底物，在一定時間內經酶催化產生的有色產物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀察或分光光度計測定。
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附于載體上，然后加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成復合物。洗滌后加酶標記的抗球蛋白（抗抗體）與之反應。洗滌后加底物顯色，有色產物的量與抗體的量成正比。（見圖5-1）
常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP），相應的底物分別是鄰苯二胺（OPD）和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應為棕黃色，后者為藍色?？捎媚繙y定性，也可用酶標儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量。
實驗六 酶聯免疫吸附實驗（ELASA）
ELASA是一種用酶標記抗原或抗體，在固相反應板上進行抗原抗體反應的方法。常用于檢測體液中的微量抗原和抗體，具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、容易判斷等優點。其檢測方法、注意事項、結果分析等詳見檢測試劑的說明書。本實驗以雙抗體夾心法為例檢測乙型肝炎病毒表面抗原介紹如下：
實驗目的
要求了解試驗原理，試驗方法及結果分析。
實驗材料
1．標本：待檢人血清
2．試劑：酶標抗體（抗HBs）、HBsAg陽性對照血清、陰性對照、洗滌液、顯色劑A、B，終止液
3．器材：已被抗體包被的微量反應板（48孔）、微量移液管、酶標儀等。
實驗內容與方法
1．在微量反應板每孔加入待檢標本50μl，設陽性、陰性對照各2孔，每孔加入陽性（或陰性）對照各1滴，并設空白對照1孔。
2．每孔加入酶結合物1滴（空白對照除外），充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。
3．棄去孔內液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復5次后拍干。
4．每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃孵育15分鐘。
5．每孔加終止液1滴，充分混勻。
6．用酶標儀讀數，取波長450nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。
實驗結果與評價
樣品OD值≥2.1陰性對照平均OD值，判斷為陽性，否則為陰性。陰性對照OD值低于0.05作0.05計算，高于0.05按實際OD值計算。
